miércoles, 8 de septiembre de 2010

CONDICIONES NECESARIAS PARA LOS MEDIOS DE CULTIVO

1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5- Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

6- pH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7- Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

MEDIOS DE CULTIVO...

Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de microorganismos, células o incluso pequeñas plantas. Según qué se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación...

miércoles, 1 de septiembre de 2010

FASES PARA LA MICROPROPAGACION DE PLANTAS VEGETALES

FASE 0 - PREPARACION DE LA PLANTA MADRE O ESCOGIDO DEL MATERIAL SER DE BUENA CALIDAD ESTAR LIBRE DE ENFERMEDADES.

FASE I - ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES ASEPTICAS DESINFECCION Y REMOCION DE CONTAMINANTES CON: ALCOHOL 70 %, CLORO 10%, AGUA DIVISION DEL MATERIAL SIEMBRA DEL MATERIAL – EN EL MEDIO DE CULTIVO
FASE 0 ESCOGIDO DEL MATERIAL
FASE I ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO

FASE II – MULTIPLICACION DEL TEJIDO O BROTES EMBRIOGENESIS DE CELULAS SOMATICAS – A. INDUCCION DE CUALQUIER CELULA DE LA PLANTA A FORMAREMBRIONES PARA PRODUCIR UNA PLANTA COMPLETA. ESTABLECIMIENTO DE CALLO EN UN MEDIO QUE CONTENGA UNA FUENTE DE NITROGENO REDUCIDO Y UNA HORMONA A BASE DE AUXINA COMO EL 2,4-D. ESTIMULAR EL DESARROLLO DE CELULAS DE CALLOS PARA DESARROLLAR LAS PLANTAS. REMOCION DE AUXINAS O REDUCCION DE LA CONCENTRACION DEL MEDIO QUE ESTIMULA LA FORMACION DEL EMBRION SOMATICO. SIEMBRA DE LOS EMBRIONES

MEJORAMIENTO DEL DESARROLLO B. AXILAR LAS YEMAS AXILARES Y TERMINALES SE INDUCEN AL DESARROLLO IN VITRO. IN VITRO – PRODUCCION DE PLANTAS A NIVEL DE LABORATORIO EN TUBOS DE ENSAYO, PLACAS PETRI O BOTELLAS O ENVASES DE CRISTAL. DESARROLLAR O AUMENTAR EL NUMERO DE RETOÑOS POR YEMAS USANDO EL REGULADOR DE CRECIMIENTO CITOQUININAS.

FASE III – ENRAIZAMIENTO Y ACONDICIONAMIENTO GENERACION DE 2 A 4 SEMANAS DURANTE LAS CUALES LA PLANTULA DESARROLLA RAICES Y SE ACONDICIONA A CRECER A CIERTA TEMPERATURA. SE CAMBIAN LAS PLANTULAS A DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVOS PARA ESTIMULAR FORMACION DE RAICES Y CRECIMIENTO VEGETATIVO. ES LA FASE MAS COSTOSA DE LA MICROPROPAGACION PORQUE CONLLEVA EL 35-75 % DEL COSTO DE PRODUCCION.

FASE IV – ACLIMATACION EN VIVO ACLIMATACION – PROCESO POR EL CUAL EL ORGANISMO SE ADAPTA A CAMBIOS DEL AMBIENTE. SE DEBEN TENER BAJO SOMBRA Y CON HUMEDAD VARIOS DIAS. EN VIVO – PRODUCCION DE PLANTAS A NIVEL DE INVERNADERO O CAMPO. LOS RETOÑOS O PLANTULAS SE TRANSFIEREN A TIESTOS QUE CONTENGAN UN MEDIO DE APOYO PARA SU CRECIMIENTO. EL MEDIO PUEDE SER MEZCLAS CON: SUELO, PERLITA, VERMICULITA, ARENA, MUSGO

ETAPAS DEL PROCESO DE MICROPROPAGACION

Dentro del proceso de micropropagación se pueden diferenciar varias fases o etapas:
1: Desinfección de las yemas de la planta y/o desinfección de semillas


2: Introducción del material seleccionado in vitro


3: Multiplicación de brotes


4: Enraizamiento


5: Aclimatación


Esta secuencia de etapas abarca el ciclo completo de la multiplicación de plantas in vitro y puede ser aplicada a diferentes especies vegetales.

¿que es la micropropagacion?

Micropropagación es el conjunto de técnicas y métodos de cultivo de tejidos utilizados para multiplicar plantas asexualmente en forma rápida, eficiente y en grandes cantidades. La micropropagación se utiliza para multiplicar o propagar plantas nuevas, tales como aquellas creadas por ingeniería genética, mutagénesis o mejoramiento genético. Se utiliza también la micropropagacion para obtener plantas libres de enfermedades (tales como virosis) u obtener grandes cantidades de plantas que no se propagan eficientemente.